人類神經干細胞移植有潛力作為治療多種中樞神經系統(tǒng)（CNS）疾病的候選藥物。 吉林中科干細胞純化了人類神經干細胞，并開??發(fā)了用于擴增和儲存的培養(yǎng)條件，以保留其獨特的生物特性。這些人類中樞神經系統(tǒng)干細胞 (HuCNS-SC?) 的生物活性已在體外和體內進行了廣泛的分析。當配制用于移植時，擴增和冷凍保存的細胞庫保持其干細胞表型、自我更新并生成成熟的少突膠質細胞、神經元和星形膠質細胞，這些細胞通常存在于中樞神經系統(tǒng)中。

人類神經干細胞的臨床轉化

在本概述中，描述了在中樞神經系統(tǒng)的三個組成部分（大腦、脊髓和眼睛）中追求神經保護策略和臨床轉化的基本原理和支持數(shù)據。

背景

吉林中科生物的成立宗旨是利用基于單克隆抗體的高速細胞分選技術平臺發(fā)現(xiàn)組織源性干細胞，該技術平臺以前用于純化造血干細胞和周圍神經系統(tǒng)干細胞。最近，該技術已被用于識別和純化其他組織干細胞，包括毛囊和皮膚、腸道、肌肉和癌癥干細胞。該技術還可應用于源自胚胎或誘導多能干細胞的多能干細胞群的純化，以消除致畸前體。該公司采用這一策略前瞻性地純化其人類中樞神經系統(tǒng)干細胞 (HuCNS-SC?) 群體，以擴展為神經球和細胞庫。在本概述中，總結了臨床前數(shù)據，并提供了將這些細胞推進涉及大腦、脊髓和眼睛的臨床試驗的基本原理。

人類神經系統(tǒng)疾病再生醫(yī)學的一項開創(chuàng)性發(fā)現(xiàn)是證明神經發(fā)生發(fā)生在成人大腦中。這一發(fā)現(xiàn)，加上我們實驗室和其他實驗室對人類神經干細胞的鑒定和擴增，引發(fā)了大量研究神經可塑性和再生的研究。雖然還處于早期階段，但越來越多的數(shù)據表明，人類神經干細胞或其祖細胞有一天可能會修復或替換患病或受損的中樞神經系統(tǒng)（CNS）內的細胞。

前瞻性鑒定、細胞庫的可重復擴增以及冷凍保存的穩(wěn)定性促進了 HuCNS-SC 向臨床測試的轉化。與一系列人類狀況相關的小動物模型的可用性進一步促進了功效測試和潛在作用機制的研究。此外，過去將細胞和組織移植到帕金森病或亨廷頓病患者大腦中的經驗（在文中進行了綜述）為中樞神經系統(tǒng)相對免疫特權微環(huán)境中的同種異體長期生存提供了見解，并鋪平了道路。用于神經干和/或祖細胞產品的研究。

關于人類中樞神經系統(tǒng)干細胞

多個實驗室通過組織培養(yǎng)系統(tǒng)中的生長和培養(yǎng)細胞命運圖譜研究中的多譜系分化，證明了小鼠和人類神經干細胞的存在。

2000年，StemCells, Inc. 的科學家純化了HuCNS-SC，一種成體組織特異性干細胞。每個 HuCNS-SC 庫均采用來自單個胎兒腦組織（妊娠16至20周）的純化人類神經干細胞創(chuàng)建，使用涉及細胞表面標記單克隆抗體和高速細胞分選的分離方案。

該細胞表達高水平的CD133和低水平的CD24(CD133⁺/CD24^-/lo )，并且缺乏造血譜系標記物CD45或CD34的表達。單個CD133⁺/CD34^–CD45 ^–分選的細胞可以自我更新，形成具有多潛能的神經球，因此具有“干細胞”的資格。當CD133⁺/CD24^{– /lo}細胞在規(guī)定條件下生長時，就建立了長期可擴展的神經球培養(yǎng)物。核型和形態(tài)穩(wěn)定性已通過十多次傳代和長期培養(yǎng)得到證實。這種細胞分離和培養(yǎng)方法可以重復生成人類神經干細胞庫。對于人類臨床應用，腦組織是根據美國食品和藥物管理局（FDA）的良好組織實踐要求，通過批準的非營利組織采購機構采購的。

這些細胞的體外分化描繪了它們成為星形膠質細胞、少突膠質細胞和不同神經元亞型的多能性。當通過刺激性培養(yǎng)基添加劑在體外誘導時，HuCNS-SC通過體外細胞功能的定量測定評估顯示遷移和吞噬活性顯著增加（圖1）。此外，對免疫缺陷小鼠模型大腦中的HuCNS-SC移植的體內分析表明，這些細胞在腦室下區(qū)的神經源性生態(tài)位中播種，緩慢分裂，并通過不同的門戶遷移，包括向嗅覺系統(tǒng)的頭側遷移流（圖2）。

長期植入（>24周）以位點特異性方式顯示全球中樞神經系統(tǒng)遷移和多譜系分化（星形膠質細胞、少突膠質細胞和神經元）（圖3）。這些體內特征為啟動特定人類中樞神經系統(tǒng)疾病的轉化研究奠定了基礎，如下所述。該公司打算開發(fā)HuCNS-SC作為基于神經保護和神經元替代策略的特定CNS疾病的同種異體細胞療法。

培養(yǎng)中的人類細胞在特定的生長因子條件下變成特定的神經元亞型。

(A) Gabaergic（γ-氨基丁酸，GABA）；

(B)多巴胺能（酪氨酸羥化酶；TH)；

(C)膽堿能（膽堿乙酰轉移酶；ChAT）。

(D)分化的神經元在體外成熟，如鉗記錄的電壓激活鈉和鉀電流所示。

(E,F) HuCNS-SC 還可分化為由神經膠質原纖維酸性蛋白 (GFAP;E) 定義的星形膠質細胞或由標記 O4 (F) 識別的少突膠質細胞。在培養(yǎng)中，罕見的少突膠質細胞可以成熟為髓鞘堿性蛋白（MBP）陽性細胞（F 插圖）。

(G)熒光珠草坪的圖像，其中通過遷移/吞噬 HuCNS-SC 清除的珠子軌跡顯示為黑色，被細胞攝取的珠子顯示為亮點（上圖），以及藍色和鬼筆環(huán)肽染色細胞中珠子的合成圖像紅色（下面板）。位于清除軌跡區(qū)域內的細胞（下圖中的紅色）與上圖中吞噬珠的亮點共定位。

(H)使用高內涵分析軟件對遷移區(qū)域（無熒光珠）進行定量。胎牛血清 (FBS) 中的因子顯著增強遷移/吞噬活性，但會被肌動蛋白聚合抑制試劑細胞松弛素 D (CytD) 阻斷。數(shù)據代表一式三份孔中的三次獨立實驗的結果。

 (A)新生兒時移植有人類中樞神經系統(tǒng)干細胞 (HuCNS-SC) 的NOD-SCID小鼠大腦的矢狀切片。使用人類特異性單克隆抗體STEM121（棕色）通過免疫過氧化物酶染色檢測人類細胞，這表明大腦內的長期植入和整體遷移。移植到側腦室后，人類細胞主要駐留在室下區(qū)（SVZ）的神經源性微環(huán)境中。觀察到從SVZ徑向遷移，包括通過頭端遷移流 (RMS) 到嗅球 (OB)。本地宿主信號定義了細胞的主要成熟結果。

(B) HuCNS-SC 分化為嗅球中的顆粒神經元。

通過使用人類特異性抗體染色來檢測移植的HuCNS-SC或其后代。通過形態(tài)學或譜系標記物的共染色來確定細胞譜系。

(A)觀察到人類星形膠質細胞（STEM123、hGFAP，紅色）與小鼠血管（β-肌營養(yǎng)不良聚糖，綠色）并列。

(B)人類少突膠質細胞（Olig2；綠色；STEM121紅色）僅限于白質區(qū)域，例如胼胝體。

(C)在嗅覺系統(tǒng)內，人類細胞分化為具有長軸突的顆粒神經元（STEM121，紅色）。

疾病的目標

治療中樞神經系統(tǒng)疾病一直是現(xiàn)代醫(yī)學最具挑戰(zhàn)性的領域之一。傳統(tǒng)藥物可以緩解一些癥狀，但很少改變病程或阻止進展，特別是在神經退行性疾病中。使用特定干細胞或祖細胞的再生醫(yī)學提供了防止進一步細胞損失（即神經保護）和/或替換受損或丟失的神經元（即神經元替代）的潛力。

此外，神經保護和神經元替代策略都可以用于治療慢性神經退行性疾病（例如，年齡相關性黃斑變性和阿爾茨海默病）和遺傳性神經退行性疾病（例如，神經元蠟質脂褐質沉著癥（Batten）、腦白質營養(yǎng)不良（Pelizaeus-Merzbacher）），以及中樞神經系統(tǒng)損傷（例如脊髓損傷 (SCI)、中風和創(chuàng)傷性腦損傷）。嘗試治療帕金森病的神經元細胞替代特別具有挑戰(zhàn)性，因為需要在特定位置恢復精確的神經元類型，并適當整合和連接到功能網絡中。因此，神經保護策略被設想為首次使用人類神經干細胞進行人體臨床研究的更容易實現(xiàn)的目標。在這方面，吉林中科生物正在積極致力于測試HuCNS-SC的多種目標適應癥（表1）。

神經保護和神經元替代策略的疾病目標

宿主細胞的神經保護可通過多種機制實現(xiàn)，包括提供神經營養(yǎng)因子、血管生成因子、免疫調節(jié)因子和/或其他維持神經元健康所需的蛋白質。新的少突膠質細胞的再髓鞘化也能保護宿主神經元。神經元替代策略旨在替代特定丟失或缺乏的細胞，如帕金森病。神經干細胞的關鍵屬性–如自我更新以提供持續(xù)的因子生成細胞庫、全中樞神經系統(tǒng)遷移特性以及形成新的正常神經元、星形膠質細胞或少突膠質細胞的天生能力–使其成為治療多種神經退行性疾病的極具吸引力的新型療法。

結論

HuCNS-SC的轉化研究涉及這些細胞在大腦、脊髓和眼睛中的生物活性。迄今為止，特定動物模型的臨床前研究已經揭示了HuCNS-SC的生物學特性，與早期臨床研究中出現(xiàn)的人類數(shù)據相似。

最終證明對患者的效果需要對照研究，但這些試驗的安全性和初步效果的初步結果為繼續(xù)進行人體測試提供了理由。如果神經干細胞移植在改變疾病進展方面繼續(xù)顯示出有希望的臨床數(shù)據，那么這種方法可以為一系列具有挑戰(zhàn)性的神經系統(tǒng)疾病提供急需的新型治療方式。

參考資料：Tsukamoto A, Uchida N, Capela A, Gorba T, Huhn S. Clinical translation of human neural stem cells. Stem Cell Res Ther. 2013 Aug 29;4(4):102. doi: 10.1186/scrt313. PMID: 23987648; PMCID: PMC3854682.

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